A agarose é um material popular nos laboratórios de biologia molecular que é normalmente utilizado para separar ADN fragmentos por eletroforese em gel.
É um polissacárido extraído de algas vermelhas, especificamente das paredes celulares de espécies dos géneros Gelidium, Gracilaria e Pterocladia.
Neste artigo, vamos analisar em pormenor o que é a agarose, as suas propriedades e as suas aplicações em vários domínios.
A agarose é um polissacárido altamente purificado que é isolado do ágar, uma substância semelhante a um gel que se encontra nas algas vermelhas.
É um meio habitualmente utilizado em laboratórios de biologia molecular para várias aplicações, como a eletroforese em gel, a separação de ADN e a purificação de proteínas.
A agarose é um polímero linear de unidades de D-galactose e 3,6-anidro-L-galactose que estão ligadas entre si através de ligações glicosídicas.
Qual é o peso molecular da agarose? A agarose é uma substância altamente estável e biocompatível que tem um peso molecular de aproximadamente 120.000 Daltons.
É insolúvel na maioria dos solventes orgânicos, mas pode ser dissolvido em água a ferver ou em soluções tampão.
A força do gel de agarose é determinada principalmente pela concentração de agarose na matriz do gel.
Os géis de baixa concentração (por exemplo, 0,5-1%) podem separar grandes fragmentos de ADN, enquanto os géis de alta concentração (por exemplo, 2-3%) são utilizados para separar pequenos fragmentos de ADN.
A agarose é normalmente preparada através da sua extração de algas vermelhas utilizando uma série de métodos químicos e físicos.
Este processo de preparação envolve a lavagem, trituração e fervura das algas para extrair o ágar, seguido da purificação do ágar através de técnicas de filtração e precipitação.
A agarose é obtida por hidrólise do ágar purificado, que é posteriormente purificado por cromatografia de permuta iónica.
A eletroforese em gel de agarose é um método amplamente utilizado para separar fragmentos de ADN com base no seu tamanho.
O método envolve o carregamento de amostras de ADN num gel de agarose, seguido da aplicação de um campo elétrico à matriz do gel.
Os fragmentos de ADN migram através da matriz de gel com base no seu tamanho, sendo que os fragmentos mais pequenos viajam mais longe do que os fragmentos maiores.
Os fragmentos de ADN isolados podem então ser visualizados utilizando várias técnicas de coloração, como o brometo de etídio ou o verde SYBR.
A agarose é amplamente utilizada em biologia molecular para várias aplicações, como o isolamento de ADN, a amplificação por PCR e a purificação de proteínas.
É um meio popular de eletroforese em gel de ADN para isolar fragmentos de ADN para análise ou purificação.
A agarose é também utilizada como matriz para a purificação de proteínas, em que as proteínas são separadas com base no seu tamanho e carga, utilizando técnicas como a cromatografia de exclusão de tamanho ou a cromatografia de permuta iónica.
A agarose tem várias vantagens em relação a outros materiais de separação, como os géis de poliacrilamida ou o acetato de celulose.
Baixa toxicidade, fácil manuseamento e pode ser facilmente preparado no laboratório.
Os géis de agarose têm também um elevado poder de resolução, permitindo a separação de fragmentos de ADN com elevada precisão.
No entanto, a agarose tem algumas desvantagens, como o seu poder de resolução limitado para pequenos fragmentos de ADN e a sua tendência para se quebrar sob tensão.
A agarose é apenas um dos vários materiais utilizados para separar fragmentos de ADN.
Os géis de poliacrilamida e o acetato de celulose são também materiais habitualmente utilizados, mas cada um tem as suas próprias vantagens e desvantagens.
Em comparação com os géis de agarose, os géis de poliacrilamida têm um maior poder de resolução e podem ser utilizados para separar fragmentos de ADN mais pequenos, mas têm a desvantagem de serem mais difíceis de preparar e manusear.
Os géis de acetato de celulose são também fáceis de preparar e manusear, mas têm um poder de resolução inferior ao dos géis de agarose.
O ágar é uma substância semelhante a um gel que se encontra nas algas vermelhas e que contém uma mistura de agarose e agarpectina.
A agarose é uma forma altamente purificada de agar que é utilizada em biologia molecular e biotecnologia.
A agarose apresenta-se em diferentes graus, consoante a sua pureza e propriedades.
Baixo ponto de fusão, baixa electroendoforese, resistência regular, alta resistência, etc.
A agarose de baixo ponto de fusão é um tipo de agarose que funde a uma temperatura inferior à da agarose padrão, o que a torna ideal para aplicações em que o gel tem de ser fundido após a utilização, como na extração de ADN.
A agarose de baixo EEO tem um valor EEO muito baixo e é recomendada para géis analíticos e preparativos com uma resolução muito boa para fragmentos de ácidos nucleicos de tamanho superior a 1000 pb (mesmo inferior a 1000 pb em concentrações mais elevadas).
A agarose tem várias vantagens que a tornam uma escolha ideal para aplicações biológicas. A sua biocompatibilidade, não toxicidade e propriedades não imunogénicas tornam-na segura para utilização em culturas celulares e outras aplicações biológicas. A sua capacidade de formar géis que podem ser ajustados ao tamanho dos poros torna-a um excelente meio para separar biomoléculas com base no tamanho. A agarose é também fácil de utilizar, o que a torna uma escolha popular em laboratórios de investigação.
Sim, a agarose pode ser utilizada como matriz para a purificação de proteínas utilizando técnicas como a cromatografia de exclusão de tamanho ou a cromatografia de permuta iónica.
Ágar vs Agarose
Agarose em pó
Agarose com baixo teor de EOE
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