La agarosa es un material popular en los laboratorios de biología molecular que se utiliza habitualmente para separar ADN fragmentos por electroforesis en gel.
Es un polisacárido que se extrae de algas rojas, concretamente de las paredes celulares de especies de los géneros Gelidium, Gracilaria y Pterocladia.
En este artículo analizaremos en profundidad qué es la agarosa, sus propiedades y sus aplicaciones en diversos campos.
La agarosa es un polisacárido altamente purificado que se aísla del agar, una sustancia gelatinosa que se encuentra en las algas rojas.
Es un medio utilizado habitualmente en los laboratorios de biología molecular para diversas aplicaciones, como la electroforesis en gel, la separación de ADN y la purificación de proteínas.
La agarosa es un polímero lineal de unidades de D-galactosa y 3,6-anhidro-L-galactosa unidas entre sí por enlaces glucosídicos.
¿Cuál es el peso molecular de la agarosa? La agarosa es una sustancia altamente estable y biocompatible que tiene un peso molecular de aproximadamente 120.000 Daltons.
Es insoluble en la mayoría de los disolventes orgánicos, pero puede disolverse en agua hirviendo o en soluciones tampón.
La resistencia del gel de agarosa viene determinada principalmente por la concentración de agarosa en la matriz del gel.
Los geles de baja concentración (por ejemplo, 0,5-1%) pueden separar fragmentos grandes de ADN, mientras que los geles de alta concentración (por ejemplo, 2-3%) se utilizan para separar fragmentos pequeños de ADN.
La agarosa suele prepararse extrayéndola de algas rojas mediante una serie de métodos químicos y físicos.
Este proceso de preparación implica lavar, triturar y hervir las algas para extraer el agar, seguido de la purificación del agar mediante técnicas de filtración y precipitación.
La agarosa se obtiene por hidrólisis del agar purificado, que se purifica aún más mediante cromatografía de intercambio iónico.
La electroforesis en gel de agarosa es un método muy utilizado para separar fragmentos de ADN en función de su tamaño.
El método consiste en cargar muestras de ADN en un gel de agarosa y, a continuación, aplicar un campo eléctrico a la matriz del gel.
Los fragmentos de ADN migran a través de la matriz de gel en función de su tamaño, y los fragmentos más pequeños viajan más lejos que los fragmentos más grandes.
A continuación, los fragmentos de ADN aislados pueden visualizarse mediante diversas técnicas de tinción, como el bromuro de etidio o el verde SYBR.
La agarosa se utiliza ampliamente en biología molecular para diversas aplicaciones, como el aislamiento de ADN, la amplificación por PCR y la purificación de proteínas.
Es un popular medio de electroforesis en gel de ADN para aislar fragmentos de ADN para su análisis o purificación.
La agarosa también se utiliza como matriz para la purificación de proteínas, en la que éstas se separan en función de su tamaño y carga mediante técnicas como la cromatografía de exclusión por tamaño o la cromatografía de intercambio iónico.
La agarosa presenta varias ventajas frente a otros materiales de separación, como los geles de poliacrilamida o el acetato de celulosa.
Baja toxicidad, fácil manipulación y se puede preparar fácilmente en el laboratorio.
Los geles de agarosa también tienen un alto poder de resolución, lo que permite separar fragmentos de ADN con gran precisión.
Sin embargo, la agarosa tiene algunas desventajas, como su limitado poder de resolución para pequeños fragmentos de ADN y su tendencia a romperse bajo tensión.
La agarosa es sólo uno de los diversos materiales utilizados para separar fragmentos de ADN.
Los geles de poliacrilamida y el acetato de celulosa también son materiales de uso común, pero cada uno tiene sus propias ventajas e inconvenientes.
En comparación con los geles de agarosa, los geles de poliacrilamida tienen un mayor poder de resolución y pueden utilizarse para separar fragmentos de ADN más pequeños, pero tienen la desventaja de ser más difíciles de preparar y manipular.
Los geles de acetato de celulosa también son fáciles de preparar y manipular, pero su poder de resolución es menor que el de los geles de agarosa.
El agar es una sustancia gelatinosa que se encuentra en las algas rojas y contiene una mezcla de agarosa y agarpectina.
La agarosa es una forma altamente purificada de agar que se utiliza en biología molecular y biotecnología.
La agarosa se presenta en diferentes grados, en función de su pureza y propiedades.
Bajo punto de fusión, baja electroendoforesis, resistencia regular, alta resistencia, etc.
La agarosa de bajo punto de fusión es un tipo de agarosa que se funde a una temperatura más baja que la agarosa estándar, lo que la hace ideal para aplicaciones en las que es necesario fundir el gel después de su uso, como en la extracción de ADN.
La agarosa Low EEO tiene un valor EEO muy bajo y se recomienda para geles analíticos y preparativos con muy buena resolución para fragmentos de ácido nucleico de tamaño superior a 1000 pb (incluso inferior a 1000 pb a concentraciones más altas).
La agarosa presenta varias ventajas que la convierten en una opción ideal para aplicaciones biológicas. Sus propiedades de biocompatibilidad, no toxicidad y no inmunogénicas la hacen segura para su uso en cultivos celulares y otras aplicaciones biológicas. Su capacidad para formar geles de tamaño de poro ajustable la convierte en un medio excelente para separar biomoléculas en función de su tamaño. La agarosa también es fácil de usar, lo que la convierte en una opción popular en los laboratorios de investigación.
Sí, la agarosa puede utilizarse como matriz para la purificación de proteínas mediante técnicas como la cromatografía de exclusión por tamaño o la cromatografía de intercambio iónico.
Agar frente a agarosa
Agarosa en polvo
Agarosa de baja EEO
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